法医DNA检验中新技术、新方法的应用

　　【摘要】目的：研究法医DNA检验中新技术、新方法即批量提取微量DNA检验的应用。方法：回顾性分析三起案件，并对案发现场存留的物品（捆绑胶带、电源线及白色包装带）进行批量提取微量DNA检验。结果：经过对三起案件现场存留物实施批量提取微量DNA检验后，均获取可靠的DNA，对比数据库，锁定相关的嫌疑人，案件成功告破。结论：批量提取微量DNA检验技术具有可靠、效率高等优点，对案件侦破十分有利。

　　【关键词】法医；批量提取；DNA检验；新技术

　　在案件侦破过程中，DNA检验发挥着重要的作用，批量提取微量DNA检验作为法医DNA检验中的新技术、新方法，其为案件提供更为准确的DNA检验数据，提高检案效率[1]。本实验室应用批量提取微量DNA检验技术，对三起案例的DNA检验进行回顾性分析，现报道如下。

　　一、案例

　　1、案例1

　　2014年5月15日，我市某小区一保姆及其看管的3岁小孩死于家中，经鉴定是死于他人，技术人员到达现场后立即提取捆绑受害人的胶带，要求进行DNA检验。

　　2、案例2

　　2014年7月14日，我市某办公室5台笔记本电脑失窃，报案后，技术人员立即提取该办公室现场存留的电源线，要求进行DNA检验。

　　3、案例3

　　2014年10月5日，李某蒙面近某小区实施入室抢劫，并将一房主张某打伤，技术人员通过张某反应，提取其遭捆绑过程中所用的白色包装带，要求进行DNA检验。

　　二、方法

　　1、DNA提取

　　选择TES将细轴棉棒完全浸湿，轻拭需进行DNA检验的物品，包括捆绑胶带、电源线、白色包装带等，剪取面积约为0.5cm×0.3cm的棉签，之后需小心谨慎地放入96孔板中，同时选择10mg/mLPK2μＬ、0%十二烷基肌氨酸钠10μＬ及TES70μＬ，注入于每孔中，于温度56℃条件下实施消化处理，20min后于温度99℃条件下完成煮沸，时间控制在10min。选择排枪对上清进行相应地转移，使其能够在干净96孔板中，同时选择硅珠悬液10μＬ，将其置于每孔中，于室内温度条件下静置，时间控制在5min，之后实施3000r/min离心15s。将上清弃掉，选择70%冷乙醇20μＬ，将其置入沉淀物中，使沉淀物完全处于悬浮状态，之后实施3000r/min离心15s，弃掉乙醇，再次进行一次操作；实施烘干处理；选择去离子水10μＬ注入每孔中，使沉淀物能够完全溶解，于温度56℃条件下进行保温，时间控制在15min，之后实施3000r/min离心1min；最后选取上清液1-3μＬ实施PCR反应[2]。

　　2、PCR扩增

　　对于扩增引物，可选择Amp FISTR Identifiler Plus试剂盒（由美国应用生物系统公司生产)，扩增总体积达6μＬ，主要有用去离子水补足体系、引物１μＬ、PCR反应混合物2μＬ、模板１μＬ-３μＬ。反应条件有60℃×20min、94℃×20s/59℃×3min×28cycle、95℃×11min×1cycle。

　　3、检测

　　选择ABI3100型遗传分析仪（由美国应用生物系统公司生产)，对扩增产物进行相应的检测，提取扩增产物1.5μＬ，将其加入上样液10μＬ中。

　　三、结果

　　1、案例一检验结果

　　经过对捆绑胶带实施批量提取微量DNA检验后，显示胶带侧面上存在混合DNA，经确定为一未知男子与受害人保姆的DNA，在进行数据库对比后，锁定嫌疑人梁某，梁某见证据后供认不讳，案件告破。

　　2、案例二检验结果

　　经过对电源线实施批量提取微量DNA检验后，显示电源线上存在某一男性人员的DNA，并且其分型完全一致，在进行数据库对比后，锁定嫌疑人陈某，陈某对盗窃一案供认不讳，案件告破。

　　3、案例三检验结果

　　经过对白色包装带实施批量提取微量DNA检验后，显示两处检验结果均为相同人员的DNA，在进行数据库对比后，锁定嫌疑人孙某，后孙某对入室抢劫一事供认不讳，案件告破。

　　四、讨论

　　DNA技术是案件侦破最有利的武器之一，而随着医疗技术的日益进步，DNA技术也得到快速地发展，批量提取微量DNA检验作为法医DNA检验新的技术与新的方法，其以操作简单、灵敏性高、可靠性强、效率高等多种优点在案件侦破中发挥着至关重要的作用，得到多位法医专家的认可[3]。

　　张璐等[4]人指出，在刑事案件处理过程中，常需对现场存留物进行DNA检验，而通过批量提取微量DNA检验技术，1次可有效检验90多种样本，与传统DNA技术相比，其在整个检验过程中所花的时间比较短，通常不超过2h，因此在一定程度上提高了DNA的检验效率。雷勇等[5]人认为，在案件现场存留物检验中，传统单管提取DNA方法所需的时间比较长，且其在操作上较为复杂，难度大，易产生错误，而通过新方法即批量提取微量DNA检验法，不仅可以缩短检验时间，而且能够实现网格式提取，大大提高存留物的检出率，为案件侦破提供有利、可靠的线索。本研究结果显示，三起刑事案件通过批量提取微量DNA检验后，均有效检出嫌疑人的DNA，检出率达100%，对比数据库后，可成功抓获犯人，这与相关报道一致，证实批量提取微量DNA检验技术在法医DNA检验中的重要性。

　　综上所述，批量提取微量DNA检验作为一种新技术、新方法，其检出率高，可靠性强，所需时间短，效率高，因此在法医DNA检验中发挥着重要的作用，有助于案件侦破。

　　参考文献：

　　[1]陈吉娜.DNA分子标记技术及其在法医学中的应用[J].福建医药杂志，2012，34(3)：150-151.

　　[2]张琼予，丁梅，王保捷，等.DNA提取自动化工作站在法医学领域的应用[J].中国法医学杂志，2010，25(1)：40-42.

　　[3]王勇，李红卫，刘晓炜，等.根据尸体损伤和DNA分型分析命案1例[J].中国法医学杂志，2013，28(2)：159-160.

　　[4]张璐.微量DNA检验技术及展望[J].警察技术，2012，2：4-6.

　　[5]雷勇，李栩文.应用微量DNA检验技术侦破人命案2起[J].河南科技大学学报(医学版)，2013，31(1)：46-47.

　　文/赵葱利 官艳