驱蚊草离体再生体系的建立
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- 发布时间:2014-08-29 12:40
驱蚊草,又名净蚊香草,芳香类天竺葵多年生草本植物,二年后主干木质化,四季不落叶,驱蚊草能正常开花,在国际环保、花卉市场上供不应求,但由于驱蚊草是体细胞杂合产物,所以种子不育,而用常规扦插的方法繁殖率又很低,因此采用离体快速繁殖技术才是实际可行的技术手段。
材料与方法
一、材料
供实验用的驱蚊草外值体为扦插繁殖的盆载苗,取自安徽大学生命科学学院。
二、方法
1.外植体消毒与接种
取盆栽驱蚊草幼嫩侧芽,滴加少许洗洁精,放置流水下冲洗2h,用75%酒精浸泡30S,0.1%次氯酸钠消毒6分半钟,进行表面杀菌无菌,再用无菌水冲洗8次,接种于培养基上,诱导生芽。
2.不定芽的诱导
将上述外植体接种于以MS为基本培养基,不同浓度6-BA和NAA激素配比的9种培养基中,每种培养基接种30株,每瓶3株,重复3次。各种培养基均加入蔗糖30mg·L-1,琼脂6.5mg·L-1,调节pH至5.8.培养条件为(25±2)℃下2000lx光强每天照13h。
3.根的诱导
挑选长势较好的无菌试管苗,切成单株,接种到不同配方组成的生根培养基上,每种培养基接种10瓶,每瓶三株,重复3次。培养条件同上。20d后记数生根数量和生根率,选择合适的生根培养基。
4.结果与分析
4.1不同激素配比对不定芽诱导的影响
外植体接种到培养基上30d后,统计不同激素浓度变化对不定芽增殖的影响,结果见表1。
从表1的水平和水平均值可以看出:在选择的2个因子中,随着A、B因子含量水平的上升,诱导外植体产生丛生芽数量均呈上升趋势,且三个水平差异显著。但是随着激素水平的升高,从NO6开始,丛生芽开始出现玻璃化,尤其NO8、NO9玻璃化现象更加严重,有半数以上出现玻璃化。所以,综合以上两种情况,最优培养基为NO5:MS+MS+6-BA0.2(mg/l)+NAA(0.3mg/l)。
4.2不同培养基配方对驱蚊草生根的影响
单株驱蚊草试管苗接种到培养基上20d后,将其取出洗净根部培养基,记数生根情况。
从表2结果可以得出结论:(1)基本培养基中大量元素的高低对驱蚊草组培苗生根有较大的影响,实验结果表明:基本培养基为1/2MS的生根数量普遍比MS为基本培养基的高很多。因此,在驱蚊草生根培养中应降低大量元素含量,1/2MS优于MS;(2)适量的NAA含量对生根有积极的影响,无论是在以MS为基本培养基还是1/2MS,添加NAA都能显著提高生根数量。但是,随着激素含量达到一定水平,开始显现副作用,生根数下降。因此,综合以上分析,得出结论,驱蚊草生根最优培养基为:1/2MS+NAA(0.4mg/l)。
张晨晨 孙启军 刁建刚 闫永婷
